本发明公开了一种大樱桃砧木吉塞拉组培方法及培养基，该培养方法包括外植体的采取、丛生芽的诱导、分化苗的增殖培养、分化苗的生根培养以及组培苗的大田移栽。该培养基包括诱导培养基、增殖培养基和生根培养基，本发明方法提高了大樱桃砧木吉塞拉6号的繁殖系数，降低了外植体的污染率、提高了愈伤组织分化率和移栽成活率等。本发明所述诱导培养基、增殖培养基和生根培养基配制方法能缩短培养组培苗周期，不产生变异，苗子整齐度高；快速增殖，提高繁殖系数；生根率高，根和苗之间几乎没有愈伤，均是正常根，三种培养基配合能大大提高驯化成活率，降低组培苗的成本。