本发明涉及一种草莓茎尖组织初代培养方法，包括如下步骤：1）匍匐茎的采集：匍匐茎采集时间为4-7月，选取顶端处于未展叶和第一张展叶之间、生长健壮的匍匐茎；2）匍匐茎处理：将采集的匍匐茎清洗、消毒后，在3-8℃下低温处理，处理时间72小时；3）消毒与接种：消毒和接种均在超净工作台内进行。本发明的优点是：1）可以有效防止外植体褐变的产生，保证外植体成活达到90%以上；2）采用的培养基能使外植体组织直接形成芽体，防止变异的发生，保证了后代种性的纯度；3）可以有效控制外植体的直径小于0.5mm，保证了外植体是不带有病毒，其繁殖出的后代完全无毒化。