本发明涉及一种以马尾松离体成熟胚为外植体的组织培养方法，包括以下步骤：不定芽诱导：将马尾松离体成熟胚接种到诱导培养基上，培养20天左右，待培养物诱导出芽原基后，即开始下一阶段；芽的分化与伸长：将第(1)所得的培养物转移到分化培养基上，培养数天，待分化出小芽后，即可将小芽接种到芽伸长培养基上进行芽的伸长，培养30-40天，待小苗长到常规生根程序所需高度时，进入下一步；生根：将第(2)将所得的小苗齐根取下，转至常规生根培养基中，培养28-35天，小苗根部开始出现白色的短根，此时，将生根小苗移到根伸长培养基中，之后培养30天左右，即可移栽长成正常的马尾松植株。