本发明提出了一种以幼花为外植体组培繁殖多倍体毛泡桐的方法，它包括：a.幼花的选择；b.幼花的前处理和消毒；c.幼花愈伤组织诱导；d.愈伤组织分化培养；e.芽苗分化出根；f.组培苗的移栽；g.组培植株的观察鉴定。本发明突出幼花为外植体具有再生能力强、可在冬季至早春进行多倍体组培繁殖的优势，解决了多倍体毛泡桐根段繁殖率低和叶片组培繁殖分化苗频率不高的问题，能够较大规模繁殖多倍体毛泡桐，并利用形态学和细胞学技术确定组培后代的多倍体真实性和一致性。