一种污水处理厂亚硝酸盐氧化菌实时荧光定量PCR检测方法，属于污水生物处理技术领域。本发明可以对污水处理厂中两个属的亚硝酸盐氧化菌，即硝化菌属和硝化螺菌属进行检测，不仅可以分析总的亚硝酸盐氧化菌，而且可以分析各个属的动态变化。采用通用性好、成本较低的SYBR Green荧光染料法建立了亚硝酸盐氧化菌2个属的实时荧光定量PCR标准曲线。2条标准曲线的相关系数分别为0.998和0.997，扩增效率在100%到110%之间。利用建立的标准曲线对某污水处理系统中亚硝酸盐氧化菌进行监控和鉴定。本发明提供了一种经济、简便、可靠的污水处理厂亚硝酸盐氧化菌实时荧光定量PCR检测方法。