本发明涉及肠出血性大肠杆菌O157:H7多价fliC-hcpA-tir-eae重组菌及疫苗，属于生物制药领域。分别扩增出EHEC？O157:H7的H7鞭毛(fliC)基因、菌毛(hcpA)基因、转位紧密素受体(tir)基因和紧密素(eae)基因，依次串联，克隆入表达载体pCold？I中，获得重组质粒pCold-fliC-hcpA-tir-eae，在BL21(DE3)获得高效表达。经过高密度发酵和一系列的纯化程序获得高纯度的融合蛋白分子疫苗。该疫苗的制备工艺简捷、易于放大、重复性好，所获得目标蛋白纯度较高，动物试验证明可刺激机体在体液免疫、细胞免疫和粘膜免疫方面产生高效的免疫应答，免疫预防保护和治疗作用。