本发明涉及一种用液相色谱法分离测定恩替卡韦及其全反式异构体的方法,该方法以多糖涂敷型色谱柱,以异丙醇-无水乙醇-三氟乙酸溶液为流动相,异丙醇-无水乙醇-三氟乙酸体积比为500∶500∶1,可以定量测定恩替卡韦的全反式异构体含量,从而有效控制药品质量。