本发明公开了一种叶下珠多糖PULPⅢ的提取分离方法，包括如下步骤：叶下珠全草蒸馏水洗涤去土，干燥后，粉碎，用石油醚脱脂，乙醇脱小分子糖后，药渣用水浸提，浸提液离心分离，取滤液浓缩后加入乙醇醇沉，醇沉物经除蛋白，洗涤，除杂和透析后干燥即得叶下珠精总多糖，经过脱蛋白，透析处理后，过离子交换柱，依次用适宜的NaCl梯度溶液洗脱，苯酚－硫酸法跟踪检测，得洗脱曲线，收集第3主峰组分，浓缩，重蒸水透析48h，冷冻干燥得叶下珠多糖PULPⅢ纯组分。本发明通过对叶下珠粗多糖的分离纯化，得到了纯净单一的叶下珠多糖成分。