本发明涉及一种以大菱鲆肌肉为基质的磺胺多辛残留基准物的制备方法，具体方法如下：将体重为500-600g/尾的大菱鲆养殖在海水养殖系统中，药物配制；灌喂；取样。本发明是以磺胺多辛药物在大菱鲆体内真实经过消化、吸收、输送、积累、代谢，消除等过程后残留在肌肉中而制备的基准物质。而不是单纯的以鱼肌肉为基底，添加药物制备的基准物质；此基准物质更接近实际的检测样品的性质，以此物质评价检测方法、考察实验室间的差异、验证操作员的结果准确性等工作更加科学准确。