本发明公开了一种基因载体及其制备方法和应用。该基因载体包括作为核心的金属纳米颗粒以及连接在金属纳米颗粒表面的阳性聚合物，该阳性聚合物为多聚赖氨酸。本发明还公开了基因载体的制备方法及其在表皮干细胞转染中的应用。本发明的基因载体通过多聚赖氨酸、穿膜肽与金属纳米颗粒的连接，提高了基因载体的转染效率、降低了其对细胞毒性的影响，有效地利用了多聚赖氨酸的低毒特性，并成功优化了多聚赖氨酸的低转染效率特性。