本发明提供的一种用于体外替代测试的全层皮肤模型及其制备方法，该全层皮肤自上而下分别为由表皮细胞生发复层化组成的表皮层，由成纤维细胞及其胞外基质组成的真皮层和由脂肪间充质干细胞经诱导而成的脂肪细胞及胞外基质组成的脂肪层；其制备方法模拟了人体皮肤的生长发育过程，制备周期短，方法简易，可控性强，原料易于获取，可实现大规模产业化生产，并且构建全程不使用外源支架材料，通过细胞自分泌细胞外基质形成皮肤支架，维持皮肤各层细胞生长的微环境，制备的含脂肪层全层皮肤更接近于正常人体皮肤结构，并具备相应的功能性，在体外条件下其功能和活性维持时间，能够满足相关皮肤生物学检测的需求。