本发明涉及生物技术领域，公开了抗LGR5蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞及其产生的抗LGR5单克隆抗体和应用。本发明所述抗LGR5蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞保藏编号为CGMCC？NO：11086。本发明提供的杂交瘤细胞可稳定分泌产生抗LGR5蛋白单克隆抗体，且与LGR5蛋白特异性结合，而与蛋白芯片上近10000种其他蛋白无交叉反应，显著提高了LGR5蛋白免疫检测的特异性、准确性和可靠性，广泛适用于各种干细胞和肿瘤干细胞的标记。