本发明公开了一种血管内皮细胞祖细胞的培养方法，包括：1)将多能干细胞于培养基A中诱导分化形成中内胚层前体细胞；2)将中内胚层前体细胞于培养基B中诱导分化形成血管内皮细胞祖细胞；培养基A含DMEM培养基、F12培养基、硒酸钠、碳酸氢钠、维生素C、胰岛素、激活素A、骨形成蛋白4、糖原合成酶激酶-3抑制剂；培养基B含DMEM培养基、F12培养基、维生素C、胰岛素、血管内皮生长因子和转化生长因子β信号通路抑制剂。该培养方法中使用的未含有动物源成分，能够为培养细胞提供足够的营养物质和稳定的生存环境，从而能够高效地将人类多能干细胞诱导分化形成具有高度类似于人类脐带血管内皮细胞的血管状网格的血管内皮细胞祖细胞。