一种牙周组织特异性细胞外基质的制备方法，包括以下步骤：1）人牙周膜细胞的分离与培养；2）牙周组织特异性ECM的制备；牙周组织特异性细胞外基质的应用，牙周组织特异性ECM作为体外扩增人牙周膜干细胞的应用；并促进其定向分化；具有制备方法简单、能显著促进牙周膜干细胞的体外增殖和定向分化的特点。