本发明提供一种胰岛素样生长因子(IGF-1)联合多种细胞因子体外扩增天然杀伤细胞(NK细胞)的新方法，所述方法包括：在CD34+造血干细胞的培养体系中加入下列细胞因子：胰岛素样生长因子IGF-1，干细胞因子SCF，Flt3配体Flt3-L和IL-15。具体地，从骨髓或新生儿脐带血中分离CD34+造血干细胞，在培养第0天即在培养体系中加入SCF(终浓度20-40ng/ml)，Flt3-L(终浓度40-50ng/ml)，IL-15(终浓度30-50ng/ml)以及IGF-1(终浓度100ng/ml)进行培养，可以使CD34+造血干细胞分化成NK细胞，并且达到进一步提高NK细胞扩增效率及扩增后的NK细胞杀伤功能的目的。采用IGF-1联合多细胞因子扩增NK细胞的方法有效地提高了NK细胞体外扩增倍数，而且扩增出的NK细胞具有更强的杀伤潜能。本发明的NK细胞发育培养体系具有明显的扩增优势。