本发明公开了一种细胞饲养层，是通过以下方法制备得到的：采用DMEM培养基培养BALB3T3细胞，细胞贴壁培养至铺满培养瓶70%～80%时，进行照射。以3000cGy作为放射剂量进行X线照射；照射后改用改良F培养基进行培养；培养8小时后，所得培养物即为细胞饲养层。所述细胞饲养层可以用于培养人原代肿瘤细胞或肿瘤干细胞。本发明改进了细胞饲养层的细胞类型和制备方法，制备饲养层的3T3细胞较J2细胞容易获得，且在其培养的过程中细胞浓度与状态容易控制。用于培养人原代肿瘤细胞或肿瘤干细胞时，能更好地促进原代肿瘤细胞的生长，获得更高比例的人肿瘤干细胞（CD44阳性细胞数提高约80%）。