本发明公开了一种马脐血间充质干细胞的培养基及其分离培养方法，所述培养基是在IMDM培养基中添加马血清、GM-CSF和SCF，其中马血清的体积百分数为1～50％；GM-CSF的质量浓度为1～100ng/ml；SCF的质量浓度为1～100ng/ml，余量为IMDM培养基。利用本发明方法可以从马脐血中分离出MSC，并且培养脐血MSC时，添加GM-CSF和SCF，可有效提高脐血MSC的扩增效率。