本发明公开了一种苏禽黄鸡胚胎干细胞特定基因进行靶向敲除的方法：首先查询出基因的外显子序列，克隆出基因，测序，获得完整的外显子序列，并在此序列上设计CRISPR/Cas9敲除靶位点作为gRNA，构建CRISPR/Cas9双启动子敲除载体；构建完成的Cas9载体进行SSA活性检测，对照组转染空载体，检测luciferase信号，luciferase活性相对于对照组增长的越多，则证明gRNA剪切活性越高；将具有高SSA活性的CRISPR/Cas9载体转染ESCs，流式细胞术筛选出GFP阳性细胞，提取基因组DNA，设计引物。