本发明属于生物医用材料领域，具体涉及一种用于多细胞分选和干细胞选区分化的光固化水凝胶及其制备方法。所述光固化水凝胶以具有光固化性能的改性高分子材料为原料制备而成，以直条纹状、网状或环状条纹的微图案结构分割为多个不同区域，同一区域内的光固化水凝胶硬度相同，不同区域之间光固化水凝胶的硬度相同或不同，整个光固化水凝胶至少有两种硬度。本发明一方面通过控制紫外照射固化程度，使得光固化水凝胶各区域的弹性模量不同，另一方面弹性模量不同的各区域在光固化水凝胶上呈现出微图案结构，将弹性模量与微图案结构相结合，可以实现细胞在光固化水凝胶上有选择性地粘附、增殖与分化，从而达到可控的细胞分选或细胞选区分化。