本发明公开了一种羊骨髓间充质干细胞的分离与培养方法，包括(1)获取羊骨髓；(2)PBS洗涤，ficoll密度梯度离心法分离单核核细胞，接种到完全培养基中贴壁培养，完全培养基为含有10％FBS的DMEM/F12培养基(3)接种18～24h后，用含5～10μg/L EGF和50～100mg/L NEAA的完全培养基进行培养。本发明通过改进常规的密度梯度离心法，再利用改进的培养体系对分离得到的BMSCs进行了高效扩增，成功得到了具有自我更新及分化潜能的BMSCs。利用本发明方法可建立起一种羊BMSCs的快速稳定的分离方法及和高效的扩增体系。