本发明公开了生物技术领域的一种分离培养兔骨髓间充质干细胞的方法。本发明的方法，包含以下步骤：(1)从兔骨髓腔内分离出完整的骨髓栓，并采用胶原酶消化；(2)将消化后释放出的造血细胞丢弃，将消化后的骨髓栓种于培养基中培养；(3)首次全量换液，并去除骨髓栓，然后每隔两天半量换液，培养3～15天，即可得到大量兔骨髓MSCs。本发明的方法操作简单，方便实用，可以在最早时间获得兔骨髓MSCs，3天即可获得原代MSCs；所得的兔骨髓MSCs数量大、纯净度高、增殖能力强，降低培养费用，节约培养时间。本发明方法可以从每只兔分离培养得到5×10⁷个以上的兔骨髓MSCs，可完全满足一般细胞生物学实验数量需求。