本发明公开了一种间充质干细胞的无血清完全培养基，由基础培养基和添加成份构成，所述的基础培养基为DMEM/F12，所述的添加成分由重组人胰岛素、人血清白蛋白、人转铁蛋白、胆固醇、亚硒酸钠、硝酸铁和葡聚糖组成。本发明不含有血清，大大避免了含血清培养基的血清批次间不稳定、有细胞毒性和大量异源蛋白等缺陷，为间充质干细胞的基础研究和临床治疗提供了很好的工具；本发明还在促进细胞增值方面达到了与含血清培养基及其他无血清培养基接近或相当的效果，可支持细胞的长期传代培养。