本发明涉及一种人胎盘来源间充质干细胞的分离、培养方法；针对现有常用的PMSCs分离方法中存在的问题与缺陷，其解决问题的技术方案包括以下步骤：一：用大镊子取出胎盘将胎盘切割；二：剥离胎盘母体面和婴儿面；三：胎盘绒毛消化；四：用1000mlPBS稀释消化液，过滤离心收集细胞备用；五：用PBS重悬细胞，离心沉淀细胞；六：细胞传代培养；七：细胞冻存，本发明中用胶原酶I一步消化法分离PMSCs，能够减少操作步骤，减轻细胞损伤，有效提高目的细胞所占的比例，减少其他细胞的污染；从而缩短了细胞原代培养时间并使细胞纯度得到提高，能够大幅降低成本并能很好维持PMSCs原始状态，为PMSCs的大量制备以及将来广阔的临床应用打下了坚实的基础。