本发明涉及一种分离胎盘造血干细胞的灌洗液、酶解液及方法。灌洗液包含青-链霉素双抗、酚妥拉明、维生素C和PBS。酶解液包含基础培养基、胶原酶Ⅰ、胶原酶Ⅱ、肝素钠、酚妥拉明、维生素C和Z-VAD-FMK。所述分离胎盘造血干细胞的方法为：用灌洗液清洗胎盘内血液；向胎盘内灌注酶解液室温酶解；收集酶解液，离心取细胞沉淀；用PBS重悬细胞沉淀，再添加羟乙基淀粉溶液，静置后取上层液体离心后弃去上清；用红细胞裂解液重悬细胞沉淀，裂解残留的红细胞，离心后弃上清；用培养基重悬细胞沉淀，离心后弃上清，即得胎盘造血干细胞。本发明显著提高分离提取效率，获得的细胞数量大，造血干细胞的含量高、存活率高，细胞污染率极低。