本发明涉及干细胞培养领域，尤其涉及一种培养基质及其应用与培养牙髓干细胞的方法。本发明提供的三维培养基质中以I型胶原水凝胶作为载体，以bFGF和BMP-2维持牙髓干细胞的稳定性，经6天培养，DPSCs细胞的增殖稳定且保持良好的活力，细胞数目扩大4倍。经免疫细胞化学染色，培养6天后的细胞干性维持良好，且具有较强的增殖能力。并且，本发明采用EGF和bFGF对牙髓干细胞进行原代培养，使原代细胞活性得到提高。