本发明公开了一种高复苏率的冻存骨髓间充质干细胞复苏方法，属于干细胞复苏领域。本发明的一种高复苏率的冻存骨髓间充质干细胞复苏方法，包括将冻存液从液氮中取出，投入LNG中升温1min；将冻存液从LNG中取出，在真空状态下投入冰浴中，按照平均560℃/min的升温速率迅速降温至3.2~3.9℃等四个步骤。本发明的一种高复苏率的冻存骨髓间充质干细胞复苏方法具有对骨髓间充质干细胞低细胞毒性，在玻璃化冻存复苏过程中低细胞毒性损伤，低渗透性损伤，提高冻存细胞复苏率的特点。