本发明公开了一种用于诱导干细胞向成软骨分化的制剂及制备方法与应用。该制剂包括小分子多肽、TGF-β、地塞米松和维生素C；其中小分子多肽的氨基酸序列如SEQ？ID？NO.1所示。该制剂还可包括IGFs和BMPs中的一种或两种。将前述成分混合，即得到该制剂。该制剂能直接诱导干细胞特别是人脐带间充质干细胞向软骨分化，也能诱导人类诱导多能干细胞特别是诱导多能间充质干细胞向软骨细胞的定向诱导分化，并取得了较好的效果。因此，可将该制剂用于诱导干细胞转化为软骨细胞，进而形成软骨组织。