本发明涉及一种脂肪间充质干细胞冻存液及其冻存方法；所述脂肪间充质干细胞冻存液由以下含量的下述组分组成：维生素C3-10mg/mL，维生素E2-8mg/mL，硫辛酸2-8mg/mL，人自体血清5-20％（体积分数）和余量的DMEM-LG培养基。本发明是一种不含动物血清和DMSO的脂肪间充质干细胞冻存液，由人自体血清，硫辛酸，维生素E，维生素C等主要成份组成，利用该冻存液冻存的细胞具有高复苏率，不影响细胞生长特性，复苏后细胞保持干细胞的多能性等特点。