本发明公开了一种人羊膜间充质干细胞的分离培养方法，经过人胎盘羊膜组织的采集、羊膜组织消毒、洗涤、剪碎、混合胶原酶消化、获得间充质干细胞，再进行间充质干细胞体外培养。本发明能够从人羊膜组织中获得大量表型均一稳定，增殖能力强，并有多向分化潜能的间充质干细胞，通过培养基体外扩增，纯化细胞，满足冻存或临床使用的数量。细胞培养周期短，重复性强。此方法获得的干细胞具有CD105^＋，CD90^＋，CD73^＋的表型。