本发明涉及干细胞培养领域，尤其涉及诱导脐带间充质干细胞向角膜上皮细胞分化的培养基和方法。本发明在基础培养液中添加表皮生长因子和胰岛素，从而提高hUC-MSCs向角膜上皮细胞分化的百分率。并且，该培养液中不含有异源血清，降低了风险。而本发明提供的方法将脐带间充质干细胞和羊膜上皮细胞共培养，能够显著提高分化百分率且所需培养周期较短。采用的脐带间充质干细胞来自脐带和胎盘，来源广泛，不受伦理和法理限制。