本发明涉及一种人羊膜间充质干细胞传代培养方法，其包括以下步骤：(1)待原代培养分离后的人羊膜间充质干细胞融合度达到80～90％后，吸去培养皿中的培养液，加入PBS清洗，然后吸去PBS；(2)往培养皿中加入tryplE,转移至CO₂培养箱孵育1-2min后，加入完全培养基，反复吹打，至80-90％的细胞不再贴壁；(3)离心；(4)弃去上清液，用完全培养基重悬细胞沉淀，吹打混匀，得到的细胞悬液用细胞计数仪计数；(5)细胞悬液接种培养皿中，调整细胞密度为1.3×10⁴/cm²,然后加入含有10ng/ml EGF的完全培养基，将培养基转至CO₂细胞培养箱中进行培养。本发明能获得大量的活力高的干细胞。