本发明是一种体外扩增肿瘤干细胞的方法，即利用海藻酸盐凝胶支架对肿瘤细胞进行体外三维培养，通过改变海藻酸钠的分子量、古罗糖醛酸含量与甘露糖醛酸含量（GM）比、钙离子浓度、钙化时间等支架制备参数调控凝胶支架的刚度，用于模拟不同肿瘤组织微环境中细胞外基质的软硬程度，以实现不同组织来源肿瘤干细胞的体外扩增。本发明操作简单，成本低廉，性能可控，易于规模放大，是一种很好的将不同来源的肿瘤干细胞进行体外扩增的方法。