本发明属于干细胞技术领域，涉及一种脐带血造血干细胞的体外扩增培养基及其应用。所述体外扩增培养基包括IMEM基础培养基，还包括如下组分：血清、血小板生成素、干细胞因子、FMS样酪氨酸激酶3配体、白介素-1、白介素-6、干细胞生长因子和小檗碱。本发明提供的脐带血造血干细胞的体外扩增培养基具有造血干细胞增殖率高的优点，而且能显著提高造血干细胞移植到受体内的植入能力和造血系统的重建能力，能较好的保持造血干细胞的特性，是一种理想的脐带血造血干细胞的体外扩增培养基。