本发明提供了一种脐带间充质干细胞的大量培养方法，包括：获取脐带沃顿胶；将脐带沃顿胶进行P0代培养至细胞融合度为40％～50％后，传P1代培养至细胞融合度为85％～95％；将P1代细胞于平板培养基进行接种培养，分离未被平板培养基粘附的悬浮细胞；将悬浮细胞于含有白血病抑制因子和成纤维样生长因子的培养基传P2代培养。本发明的上述组织贴壁培养的方法，将早期发生多向性变化较低的P0细胞直接培养至P1代后，用组织培养平板进行粘附筛选，保持细胞分化度的均一；之后用白血病抑制因子和成纤维样生长因子增加细胞在P2代培养中的贴壁性能以及抑制分化，从而得到分化度较低且趋于一致、贴壁能力较强利于收集的脐带间充质干细胞的。