本发明涉及一种从脐带制备间充质干细胞的方法，以及利用该方法制备的间充质干细胞。所述方法包括下述步骤：(1)取脐带样品；(2)去除血管以及其周围紧贴血管的组织；(3)制备脐带组织片；(4)分离羊膜下层组织；(5)对羊膜下层组织进行处理；(6)无细胞培养液培养；(7)加入细胞培养液继续培养；(8)胰酶消化；(9)过滤；(10)将滤液离心并去除上清，重新悬浮获得脐带组织间充质干细胞。利用本发明的方法制备的间充质干细胞纯度高，增殖和分化潜能大，在基础研究和临床治疗中具有广泛的应用前景。