本发明公开了一种人脐带间充质干细胞的提取和培养方法。脐带组织切碎后经I型胶原酶消化后移入含培养基的培养瓶中持续培养。所用培养基为低糖DMEM基础培养基并且添加了胎牛血清、成纤维生长因子、上皮细胞生长因子、细胞转录因子、胆固醇。使用本发明的提取和培养方法可以长期培养人的脐带间充质干细胞，并且维持干细胞活性。本发明解决了目前人脐带间充质干细胞培养中细胞衰老过快以及分化问题，能够长期获得具有干细胞特性的人脐带间充质干细胞。