本发明公开了一种新型造血干细胞检测试剂制备方法和应用。所述制备方法，包括：溶解甲基纤维素，依次按照比例加入IMDM培养基、胎牛血清、经过离子交换树脂处理的牛血清白蛋白、2-ME、重组人干细胞生长因子、重组人粒-巨噬细胞集落刺激因子、重组人白细胞介素3。本发明获得的造血干细胞检测试剂可以检测人和小鼠骨髓、外周血、脐带血中的造血干细胞数量，富有应用前景。