本发明提出了一种富集和无分化扩增悬浮干细胞的方法，在血液肿瘤细胞的集落培养中，向胚胎干细胞培养基中加入Delta-like 4，Jagged 1和FGF2成分因子为培养基主要组分，并向所述胚胎干细胞培养基中加入抑制GSK信号通路抑制剂和酪氨酸激酶抑制剂，进行半固体培养，血液肿瘤细胞可以形成集落，解决了现有技术中肿瘤干细胞无法高效低毒的实现富集和无分化扩增的问题。