一种人脐带血间充质干细胞分离液及其分离流程。分离液由9％聚蔗糖与33.9％泛影葡胺按26.88∶10配伍而成，密度1.073±0.001g/L。两步法分离脐带血间充质干细胞流程：第一步：羟乙基淀粉沉淀红细胞。第二步：密度1.073g/L分离液分离间充质干细胞。本发明分离液和分离流程可得到脐带血中最大比例的间充质干细胞，淋巴细胞和单核细胞比例很小，获得的细胞状态好、活力高。所用材料、试剂为医用级产品，无毒无热源，可产业化生产，便于储存。所用方法为优化的流程，稳定性、重复性好。还可用于人骨髓、外周血间充质干细胞的分离。是目前密度梯度离心法中分离提取间充质干细胞的最优方法，优于其它同类产品和方法。