本发明涉及干细胞及组织工程领域，特别是一种从人脐带中提取间充质干细胞的方法,针对现有人脐带间充质干细胞的分离，培养技术中存在的问题与不足，其解决问题的技术方案是：一种人脐带间充质干细胞的分离方法，由下述步骤组成：一：脐带组织块制备；二：组织块消化；三：过滤消化液离心收集细胞；四：合并细胞沉淀，离心，收集细胞；五：传代培养；六：使用程序降温仪冻存细胞，放入液氮中冻存；本发明既减少了成本又可以快速获得间充质干细胞，减少对细胞的伤害，提高冻存年限和细胞活性，缩短了操作流程，减少污染，而且能够提高细胞纯度。