本发明涉及制备胰腺干细胞的方法及其专用培养基组合。具体而言，本发明公开了一种诱导人间充质干细胞获得胰腺干细胞的方法及其配套的培养基组合。本发明所述的方法经过两步诱导法可在体外一次获得限定性内胚层细胞及胰腺干细胞，各阶段细胞可表达相应的特异性基因，并且最后获得的胰腺干细胞能够分化成为有功能的胰腺内分泌细胞及胰腺外分泌细胞。本发明获得的胰腺干细胞可以用于治疗糖尿病等疾病导致的胰腺损伤，为胰腺损伤疾病的细胞治疗提供实验依据和临床研究证据，为细胞移植治疗提供了新的途径。