本发明公开了人脂肪间充质干细胞经三维培养后分化成神经样干细胞的方法，包括以下步骤：将三维材料在37℃聚胶30分钟；再加入人脂肪间充质干细胞，于37℃，5%CO₂培养，隔日更换培养液；所述聚胶溶液为I型胶原溶液、聚乳酸溶液或丝素蛋白溶液。本发明利用三维培养技术为神经分化提供一种体内样的三维立体生长环境，促进了细胞之间的联系，使细胞形成多层生长，同时可以更好地维持干细胞的自我更新和多向分化特性；无化学诱导因子的作用，分化后神经样干细胞可直接用于后续临床试验，更安全。