本发明公开了一种兔脐带间充质干细胞的制备方法，选用兔脐带为原材料，包括以下步骤，兔脐带组织的清洗、兔脐带组织的消化、细胞接种、传代培养、即时使用或冷冻保存备用。按照本发明获得的兔脐带间充质干细胞经表面抗原检测及多向分化鉴定，符合间充质干细胞产品合格标准，具有较高的增殖及分化潜力。按照本发明获得的兔脐带间充质干细胞为以兔为实验动物的干细胞相关应用研究提供了一种新的同种异体移植的种子细胞，极大程度上保证了脐带间充质干细胞的低免疫原性，极大地丰富了现有的种子细胞库。