本发明属于细胞分离技术领域，具体公开了一种兽肠道干细胞的分离培养方法；本发明首先筛选可用于兽肠道干细胞分选的特异性抗体，所述抗体包括CD24、CD44和CD166，所述CD24抗体来源于ML5单克隆；利用该抗体，通过流式细胞技术可针对性的筛选出兽肠道干细胞，通过建立三维的培养体系，可培养出类肠团，本发明为肠道上皮更新研究和组织特异性干细胞移植提供良好的材料。