本发明公开了一种造血干细胞冻存的方法及保护剂，具体是在无菌条件下，将造血干细胞悬液或骨髓液与干细胞保护剂混合冷冻保存即可，所述的干细胞保护剂成分包括：DMSO，1640无菌培养基和血液保存液Ⅰ，三者体积比例：9-10∶5∶5-6。该方法能够减低造血干细胞保护剂的成本，无需程序降温仪等高造价设备，无需添加液氮的繁琐、高风险程序，操作简单，易于在各级医疗机构推广。