本发明提供了一种制备自体造血干细胞的方法，该方法包括：将体细胞在细胞培养液中培养3-6天，收集生成的自体造血干细胞，其中，所述细胞培养液是RPMI1640培养液，其中含有1-100μM的Y-27632（C₁₄H₂₁N₃O·2HCl）；1-100ng/mL的干细胞因子；1-100ng/mL的白细胞介素3；1-100ng/mL的白细胞介素6；1-100ng/mL的白细胞介素11；1-100ng/mL的巨噬细胞集落刺激因子（M-CSF）；1-100ng/mL的粒细胞集落刺激因子（G-CSF）；1-100μg/mL的岩藻多糖；1-100μg/mL的硫酸葡聚糖；1-100nM的AMD3100（1,1′-[1,4-亚苯基二(亚甲基)]-二-1,4,8,11-四氮杂环十四烷）；1-100μM的M-阿仑膦酸钠(Malendronate sodium trihydrate)；1-100μM的帕米膦酸二钠。由此，本发明提供了一种制备自体造血干细胞的方法、试剂盒、干细胞及应用，并且本发明提供的蛋白诱导性自体造血干细胞的生产方法在产量、纯度、生产速度及安全性方面具有显著优势。