本发明涉及一种神经干细胞库的构建方法，分为以下几个步骤：（1）GMP实验室及冷冻库的基础建设：脑细胞库由GMP实验室和冷冻库组成。（2）GMP实验室质控建设：严格按照以下神经干细胞操作培养规范进行，以确保质量控制；(3)神经干细胞培养流程，包括以下步骤：（A）采集脑细胞；（B）神经干细胞的分离和传代；（C）BrdU标记；（D）神经干细胞的诱导分化；（E）条件培养液的制备；（F）神经干细胞的定向诱导分化；（G）免疫细胞化学染色；（H）冷冻；（I）登记储存。本发明的脑干细胞库构建方法，主要是改变了存储思路，中间再次复苏延长了存储时间，能够长时间存储才实现细胞库的功能。