本发明涉及肌肉干细胞体外培养方法及其应用。本发明的肌肉干细胞体外培养方法，为采用添加有血液细胞的细胞因子的细胞培养基或血液细胞的条件培养基体外培养肌肉干细胞。本发明还进一步公开了所述肌肉干细胞体外培养方法所用培养基及其应用。采用本发明的方法，肌肉干细胞可以增殖十次以上。更重要的是，在本发明的培养基中，肌肉干细胞可以连续传代，并继续保持干性和分化潜能，并且扩增后的肌肉干细胞均保持干性和完整分化潜能，能够在体内修复肌肉损伤，这就使得利用体外培养的肌肉干细胞用于再生医学治疗的策略在临床上具有可行性。