本发明提供一种牙髓干细胞的规模化生产工艺，包括以下步骤：（1）牙髓干细胞的分离提取；（2）牙髓干细胞的二维培养扩增；（3）牙髓干细胞的检测；（4）牙髓干细胞的大规模培养；（5）牙髓干细胞的冷冻保存；（6）牙髓干细胞的长期冷冻保存。本发明提供了一种牙髓干细胞的体外规模化培养扩增方法，建立了高质量高活性牙髓干细胞的长期、标准化、系统化冻存体系，以便为临床及科研提供足够高质量的干细胞资源，成本低廉，应用前景广阔。