本发明涉及一种间充质干细胞的三维培养方法，所述方法包括以下步骤：获取间充质干细胞，将间充质干细胞与PM多肽水凝胶混合后进行培养。本发明通过利用具有三维网状结构的PM多肽水凝胶为间充质干细胞提供一个模拟人体内细胞生长的环境，为间充质干细胞提供充足的生长空间和营养需求，有利于间充质干细胞的扩增及提高间充质干细胞的细胞活性。